海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建
目的:构建海南坡鹿外周血白细胞eDNA文库.方法:采用RNAiso Reagent (TAKARA)处理新鲜血液,以总BNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA.利用SMART(Switching Mechanism at 5'end of RNA Transcript)技术,用PaWerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PeR扩增获得cDNA双链,Sfi I酶切和CHROMA APIN-400TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNRLIB载体连接,电转化入E.coli DG5a,建成原始文库.然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小.结果:经鉴定,库容量达到1.9×106克隆,原始文库滴度为1.59×1010cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×1012cfi/mL.插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb.结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础.
作 者： 申明霞 刘涛 杜丽 王凤阳 成鹰 许世英 吴科榜 李治深 符运南 林贤梅 满初日嘎 祁超 SHEN Ming-xia LIU Tao DU Li WANG Feng-pang CHENG Ying XU Shi-ying WU Ke-bang LI Zhi-shen FU Yun-nan LIN Xian-mei MAN Chu-ri-ga QI Chao 作者单位： 申明霞,SHEN Ming-xia(华中师范大学生命科学学院,湖北,武汉,430079;海南大学农学院,海口市动物基因工程重点实验室,海南,海口,570228)刘涛,杜丽,王凤阳,成鹰,吴科榜,李治深,满初日嘎,LIU Tao,DU Li,WANG Feng-pang,CHENG Ying,WU Ke-bang,LI Zhi-shen,MAN Chu-ri-ga(海南大学农学院,海口市动物基因工程重点实验室,海南,海口,570228)
许世英,符运南,林贤梅,XU Shi-ying,FU Yun-nan,LIN Xian-mei(海南大田国家级自然保护区,海南,东方,572600)
祁超,QI Chao(华中师范大学生命科学学院,湖北,武汉,430079)
刊 名： 生物技术 PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2008 18(2) 分类号： Q785 关键词： 海南坡鹿 外周血白细胞 cDNA文库 SNART技术