结缔组织生长因子特异性结合肽的表达及分离纯化
目的:利用基因工程技术获得与结缔组织生长因子(CTGF)特异性结合的小肽.方法:设计并合成带有肠激酶切割位点的基因片段,插入pET-32(a)+质粒载体中硫氧化还原蛋白基因下游,构建重组质粒,转入E.coli BL21表达菌中,用终浓度1mmol·L-1的IPTG诱导表达融合蛋白;用热变性和硫酸铵分级沉淀对融合蛋白进行初步纯化,然后用亲和层析进一步纯化,经肠激酶切割,最后用凝胶过滤层析分离获得目的小肽;用反相色谱对所获小肽进行纯度鉴定.结果:所构建的重组质粒测序结果与预期一致;诱导表达后用SDS-PAGE鉴定,发现在相对分子质量20 000处有浓密的表达条带出现,与预期一致;融合蛋白用热变性和硫酸铵分级沉淀进行初步纯化,得率分别为78.6%和52.3%;用亲和层析纯化得率为50.5%;经肠激酶切割后用凝胶过滤层析分离获得目的小肽,用反相色谱鉴定其纯度大于95%;最终每升发酵液获得3.4mg目的肽.结论:成功制备CTGF特异性结合肽,为进一步研究该小肽的生物学活性打下基础.
作 者： 王明虹 吴国球 刘乃丰 WANG Ming-hong WU Guo-qiu LIU Nai-feng 作者单位： 王明虹,刘乃丰,WANG Ming-hong,LIU Nai-feng(东南大学,临床医学院,江苏,南京,210009)吴国球,WU Guo-qiu(东南大学附属中大医院,临床检验中心,江苏,南京,210009)
刊 名： 东南大学学报（医学版） ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 2008 27(4) 分类号： Q78 关键词： 结缔组织生长因子 分离纯化 特异性肽