人IP-10蛋白原核表达及其活性鉴定
目的 构建人His标记的γ干扰素诱导蛋白10 (interferon-γ-inducible protein 10, IP-10)融合蛋白表达载体并在原核细胞中表达、纯化,获得有活性的IP-10蛋白,为进一步研究其在炎症过程中的作用机制及寻找新的抗炎途径提供基础.方法 从人肺cDNA文库中PCR扩增无信号肽的IP-10基因编码序列,构建重组载体pET-14b/IP-10;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株;经异丙基γ-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,用镍离子亲和层析柱纯化融合蛋白,以THP-1细胞进行微室跨膜迁移(transwell)实验鉴定融合蛋白活性.结果 酶切、测序鉴定重组载体pET-14b/IP-10构建正确,并纯化得到高纯度的IP-10融合蛋白.而且该蛋白具有诱导单核细胞THP-1跨膜迁移活性.结论 成功构建了人IP-10融合蛋白表达载体,并纯化得到具有活性的IP-10融合蛋白,为进一步研究IP-10的功能提供了重要的实验材料.
作 者： 邵紫韫 彭毅 SHAO Zi-yun PENG Yi 作者单位： 邵紫韫,SHAO Zi-yun(广州军区武汉总医院医务部,武汉,430070)彭毅,PENG Yi(广州军区武汉总医院心血管内科)
刊 名： 华南国防医学杂志 ISTIC 英文刊名： MILITARY MEDICAL JOURNAL OF SOUTH CHINA 年，卷(期)： 2008 22(4) 分类号： Q78 关键词： γ干扰素诱导蛋白10 融合蛋白 细胞迁移