海洋破囊壶菌△~5-延长酶和△~4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达

海洋破囊壶菌△~5-延长酶和△~4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达

二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA C22:6n-3)是具有各种重要生理功能的高度不饱和脂肪酸.分别以质粒pYTFD5和pYFAD4为模板,扩增获得860 bp的△5-延长酶基因(elo5)和1 600 bp的△4-脱饱和酶基因(fad4).利用重叠延伸PCR构建elo5-fad4融合基因,Hind Ⅲ/Sph Ⅰ双酶切后连接到经同样处理过的pYES2.0载体,构建重组表达质粒pYEL05-FAD4.转化酿酒酵母尿嘧啶缺陷型菌株INVScl,通过缺少尿嘧啶的选择性培养基筛选阳性克隆子.添加外源脂肪酸C20:5底物.半乳糖诱导表达.气相色谱-质谱分析表明,重组酵母总脂肪酸中出现了DHA(二十二碳六烯酸,C22:6n-63)新产物,融合基因elo5-fad4在酿酒酵母中得到了表达.图7表1参18

作 者： 刘艳如 江贤章 高媛媛 田宝玉 陈晓峰 陈金卿 黄建忠 LIU Yanru JIANG Xianzhang GAO Yuanyuan TIAN Baoyu CHEN Xiaofeng CHEN Jinqing HUANG Jianzhong   作者单位： 福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州350108  刊 名： 应用与环境生物学报  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY  年，卷(期)： 2009 15(6)  分类号： P7  关键词： 破囊壶菌   二十二碳六烯酸   延长酶   脱饱和酶   共表达   Thraustochytrium   docosahexaenoic acid   elongase   desaturase   co-expression