细胞凋亡与肝脏疾病
[关键词] 细胞 肝脏疾病健康网讯:
刘增权 李孝生 400010重庆医科大学附属第二医院消化内科 自从1972年病理学家Kerr首先对细胞凋亡进行描述以来，经过20余年的研究，人们认识到细胞凋亡在组织的自动平衡中起着重要作用。细胞凋亡是通过正常的方式在多细胞生物中消除不需要的、衰老的和受损的细胞，使机体细胞有丝分裂的速度与凋亡的速度相平衡。任何情况的异常凋亡对机体都是有害的，都会产生不良后果，肝脏也不例外。目前人们认识到异常凋亡在肝病的发生、发展起着重要作用:一方面，肝细胞过度凋亡可以导致严重的肝脏损伤;另一方面，诱导凋亡机制的丧失可以导致肝癌的发生。因此，对肝病患者需抑制肝细胞的凋亡，对肝癌患者需选择性的诱导肝细胞的凋亡。 1 细胞凋亡的定义和检测方法 1.1 定义 细胞凋亡是一个主动过程，是机体在生理或病理条件下受到刺激后，导致细胞产生一系列形态和生化方面的改变而引起的程序性细胞死亡（programmed cell death，PCD）。细胞凋亡的特点:（1）细胞变小，核固缩，细胞膜完整。（2）核碎裂，DNA断裂成180～200bp，而且有蛋白质和mRNA的合成。（3）膜包绕的凋亡小体形成（在肝细胞称为Councilman小体）。（4）凋亡小体被邻近巨噬细胞吞噬，这整个过程进展非常快，由数分钟到几个小时 ［1］ 。（5）一般周围无炎症反应，但如果凋亡速度大于清除速度，则组织结构被破坏而且伴随炎症反应 ［2］ 。与凋亡不同，坏死是一个被动过程，坏死细胞变大，核溶解，膜通透性改变，线粒体结构变化，DNA随机断裂，其间没有蛋白质和mRNA的合成，坏死周围有炎症反应。 1.2 检查方法 （1）对细胞凋亡形态学的观察有HE染色光镜观察以及电子显微镜、相差显微镜、共聚焦激光扫描显微镜检查。（2）对DNA降解片段的分析有琼脂糖凝胶电泳检测DNA以及Southern Blotting方法。（3）荧光标记膜蛋白V的检测 ［3］ 。（4）流式细胞技术（FCM）可以对活体或已固定的凋亡细胞进行定量分析。（5）末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记术（TUNEL）。（6）免疫组化。 2 凋亡机制 细胞凋亡的生化特点包括质膜磷脂排列方向改变、细胞内离子环境自稳改变、蛋白酶和核酸内切酶激活分别致细胞蛋白质裂解和DNA断裂、细胞内产生神经酰胺（ceˉramide）、线粒体功能障碍、谷胱甘肽耗竭以及转谷氨酰胺酶（transglutaminase）激活 ［1，4］ 。 参与引发细胞凋亡的蛋白酶有多种，包括半胱氨酰天门冬氨酸特异蛋白酶（CASPSE，cysteingylaspartase specific proˉtease）家族成员和组织蛋白酶等 ［5］ 。特别是caspase家族成员与细胞凋亡关系最为密切，至少有14种哺乳动物caspase已获克隆，但仅对caspase-3和caspase-8的功能有所了解。caspase-8在细胞凋亡中发挥启动作用;caspase-3在细胞凋亡中发挥效应作用 ［6］ 。由于各caspase可相互激活，所以caspase蛋白酶级联反应（caspase protease cascade）是导致细胞凋亡结构改变的主要环节。线粒体功能障碍在细胞凋亡发生机制中起关键作用 ［6］ ，能促进线粒体功能障碍的因素很多，包括各种有害刺激和信号传递过程，其中某些配体/受体相互作用最为重要。配体与靶细胞表面受体相结合，就导致复杂的多蛋白[1] [2] [3] [4] [5]