可溶性三聚化CD40-异亮氨酸拉链融合蛋白的制备及鉴定
以克隆的CD40 cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于包涵体中,对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的sCD40IZ重组蛋白,该蛋白在溶液中的分子量为91kD,表明最有可能以三聚体形式存在.活性分析显示该蛋白能够与细胞上的CD40L结合,并且其结合活性与不含IZ基序的可溶性CD40相比明显提高.这些结果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能够促进形成三聚体,并且具有增强的配基结合活性.
作 者： 徐丽慧 刘毅 何贤辉 XU Li-Hui LIU Yi HE Xian-Hui 作者单位： 徐丽慧,XU Li-Hui(暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室,广州,510632;暨南大学生物工程研究所,广州,510632)刘毅,何贤辉,LIU Yi,HE Xian-Hui(暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室,广州,510632)
刊 名： 生物工程学报 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(3) 分类号： Q78 R392.12 关键词： CD40 三聚化 异亮氨酸拉链 原核表达 包涵体 复性