定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建
一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术,构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法:用RT-PCR技术,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA,并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理,以导致hSCF cDNA中一小片段缺失,由此获得重组pGEMSCF模拟体(mimic),经体外转录得到hSCF RNA-CRS.测序表明:该RNA-CRS与hSCF mRNA比较,缺失了从第499位至608位共110个核苷酸,但二者RT-PCR反应可用同一对扩增引物,反应动力学极为相似.这种hSCF RNA-CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准,适用于定量RT-PCR中,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析.此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及/或调控的检测和研究.
作 者： 谭文斌 聂怡玲 罗赛群 郭小珊 成光杰 陈汉春 朱定尔 TAN Wen-Bin NIE Yi-Ling LUO Sai-Qun GUO Xiao-Shan CHENG Guang-Jie CHEN Han-Chun ZHU Ding-Er 作者单位： 湖南医科大学分子生物学研究中心,长沙,410078 刊 名： 生物化学与生物物理进展 ISTIC SCI PKU 英文刊名： PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS 年，卷(期)： 2000 27(3) 分类号： Q7 关键词： 基因表达定量 定量RT-PCR 人干细胞因子基因