鲢(Hypophthalmichthys molitrix)IL-10基因的克隆及表达分析
白细胞介素10(IL-10)是一种作用广泛的抗炎细胞因子,主要功能是限制和最终终止炎症反应.用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10(IL-10)的cDNA,其全长为1248nt,包含5'非编码区156nt,3'非编码区552nt,开放阅读框540nt.鲢IL-10的开放阅读框编码179个氨基酸,其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸.RT-PCR结果显示鲢IL-10mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达.将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c(+)上,转入大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)内进行表达,经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39 ku处有明显表达带,与预期分子量大小一致,且主要以不可溶的包涵体形式存在.变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白,将其免疫家兔,获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体,Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合.这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础.
作 者： 肖凡书 昌鸣先 孙军 肖调义 聂品 作者单位： 肖凡书(湖南农业大学动物科技学院,长沙,410128;中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072)昌鸣先,聂品(中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072)
孙军(暨南大学水生生物研究所,广州,510632)
肖调义(湖南农业大学动物科技学院,长沙,410128)
刊 名： 自然科学进展 ISTIC PKU 英文刊名： PROGRESS IN NATURAL SCIENCE 年，卷(期)： 2006 16(2) 分类号： Q95 关键词： 鲢 IL-10 克隆 组织表达 原核表达