用小双链RNA抑制转化入HUVEC中绿色荧光蛋白基因的表达
目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),研究小干扰RNA(siR-NA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用.方法:用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGFP转入HUVECs中.用G418筛选并维持已转化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP).利用T7RNA转录试剂盒,制备可抑制GFP基因表达的siRNA(GFPsiRNA)和无关对照的RNA(control siRNA).用oligofectamine将siRNA转入HUVEC-GFP中.继续培养48 h后,检测HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表达水平.结果:用G418筛选获得了HUVEC-GFP细胞株,可以观察到GFP的稳定表达.HUVEC-GFP转化siRNA后48 h,GFP的荧光强度明显下降,而对照组的荧光强度无明显下降.半定量RT-PCR检测显示,GFPsiRNA对GFP mRNA表达有较强的抑制作用,抑制率达40%,而control siRNA对GFPmuRNA表达水平无明显的抑制作用.结论:利用体外转录合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表达.
作 者： 单志新 林秋雄 余细勇 邓春玉 郑猛 谭虹虹 符永恒 杨敏 林曙光 SHAN Zhi-xin LIN Qiu-xiong YU Xi-yong DENG Chun-yu ZHENG Meng TAN Hong-hong FU Yong-heng YANG Min LIN Shu-guang 作者单位： 广东省人民医院医学研究中心,广东,广州,510080 刊 名： 中国病理生理杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(2) 分类号： Q78 关键词： RNA干扰 绿色荧光蛋白 人脐静脉血管内皮细胞 脂质体