人IP-10启动子的克隆和转录活性的检测
目的克隆干扰素诱导蛋白10(IP-10)5′非编码区(NCR)片段,检测克隆的IP-10启动子驱动的荧光素酶报告基因在LPS激活的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的转录活性.方法提取人外周血淋巴细胞基因组DNA,以其为模板,利用巢式PCR扩增人IP-10启动子片段,测序正确后克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3;将重组质粒pGL3/IP-10P导入HUVEC细胞,检测LPS刺激下荧光素酶活性.结果正确克隆出人IP-10启动子(-2028～-1)片段,成功构建了pGL3/IP-10P报告基因表达载体;证实了LPS可诱导HUVEC细胞中IP-10的高表达.结论成功克隆出人的IP-10启动子片段,并利用荧光素报告基因证实了在HUVEC细胞中LPS可诱导IP-10高转录表达,为深入研究LPS诱导IP-10转录表达的调控机制提供了基础.
作 者： 邵紫韫 刘志锋 彭毅 邓鹏 姜勇 作者单位： 510515,广州,南方医科大学广东省功能蛋白质组学重点实验室 刊 名： 解放军医学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY 年，卷(期)： 2006 31(3) 分类号： Q291 关键词： 干扰素诱导蛋白10 脂多糖类 基因,报告