PSF不同功能片段融合蛋白的构建及其在细胞内的分布
目的 将人类PSF基因的不同功能片段定向连入pEGFP-C2质粒,使PSF蛋白的各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,观察其在HeLa细胞中的表达及定位. 方法 以重组质粒pEGFP-C2-PSF为模板,PCR法扩增出目的基因,将扩增片段双酶切后连接到质粒pEGFP-C2上,构建重组质粒pEGFP-C2- PSF(Ⅰ～Ⅴ).将构建成功的pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)质粒脂质体法转染HeLa细胞,Western印迹检测融合蛋白的表达,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的定位与分布. 结果 成功构建质粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ),并在HeLa细胞中实现表达;Western印迹检测到融合蛋白GFP-PSF(Ⅰ～Ⅴ);在激光共聚焦显微镜下观察到绿色的融合蛋白表达和定位. 结论 人类PSF基因的不同功能片段的重组质粒pEGFP-C2-PSF(Ⅰ～Ⅴ)构建成功,可用于标记PSF蛋白的不同功能片段,为进一步研究PSF在信号转导中的作用机制以及其生物学功能奠定基础.
作 者： 张馨予 东莉洁 付晓 杨振霞 杨洁 ZHANG Xinyu DONG Lijie FU Xiao YANG Zhengxia YANG Jie 作者单位： 刊 名： 医学分子生物学杂志 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2010 7(2) 分类号： Q7 关键词： 人类PSF蛋白 pEGFP-C2 重组质粒 融合蛋白 human PSF protein pEGFP-C2 recombinant plasmid fusion protein