MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况. 方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况.结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布.在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变.结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响.

作 者： 魏洁 龚小卫 明小燕 王旭 王达安 邓鹏 姜勇 WEI Jie GONG Xiaowei MING Xiaoyan WANG Xu WANG Daan DENG Peng JIANG Yong   作者单位： 南方医科大学,病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室,广东,广州,510515  刊 名： 贵阳医学院学报  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE  年，卷(期)： 2008 33(3)  分类号： Q786  关键词： 蛋白激酶类   突变   基因表达   细胞内定位   p38丝裂原活化蛋白激酶   MAPK激活蛋白激酶2