酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建
目的:构建酿酒酵母HOR2基因缺失的突变株并研究其对甘油和乙醇产造的影响.方法:以PCR为基础,通过同源重组的方式使目的基因缺失.结果:通过设计含有与HOR2(GPP2)基因两侧序列同源的长引物,以质粒PUG6为模板进行PCR构建含有Cre/loxP系统的酿酒酵母HOR2基因敲除组件,转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS,获得为loxP-kan-loxP序列组件所替换而产生kan'的阳性克隆子.然后再将质粒PSH65转入阳性克隆子诱导表达Cre酶切除筛选标记,在原ORF基因处保留一个loxP位点,丢失质粒后获得HOR2单倍体缺陷型菌株.重复转化敲除组件实现另一条等位基因的敲除.发酵实验表明,突变株甘油产量降低3.34%,乙醇产量提高1.96%.结论:成功获得了酿酒酵母HOR2基因缺失的突变株,并命名为YS_2-HOR2.
作 者： 陈永金 林晓华 王艳尊 雷娟娟 黄建忠 作者单位： 福建师范大学生命科学学院,工业微生物教育部工程研究中心,福建现代发酵技术工程研究中心,福建福州350108 刊 名： 生物技术 PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 20(2) 分类号： Q785 关键词： 酿酒酵母 HOR2基因 基因敲除 乙醇 甘油 Saccharomyces cerevisiae HOR2 gene gene knockout ethanol glycerol