海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象,从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究.结果表明,在相同条件下,第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86.9%、70.3%、66.8%、63.4%、60.2%,再生率分别为10.5%、18.6%、17.9%、18.2%、17.8%;取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体,原生质体的形成率分别为72.1%、70.4%、60.5%,再生率为13.4%、18.9%、10.4%;溶菌酶浓度为2.5 mg/mL、5 mg/mL、10 mg/mL、20 mg/mL,酶解60 min,原生质体的形成率分别为40.6%、70.8%、81.8%、95.6%,原生质体的再生率为19.0%、19.2%、19.0%、10.6%;使用10mg/rmL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30 min、60 min、90 min、120 min,原生质体的形成率分别为30.8%、81.3%、81.7%、82.9%,原生质体的再生率分别为19.2%、19.3%、16.9%、11.2%;在细菌培养液中添加终质量浓度为5 mg/mL、10 mg/mL、20mg/mL和40mg/mL的甘氨酸,培养该菌16 h后制备原生质体,原生质体的形成率分别为81.0%、81.1%、90.3%、90.8%、90.6%,再生率为19.1%、19.0%、19.3%、12.0%、9.0%;EDTA对原生质体的形成稍有促进作用,但作用超过30 min会影响原生质体的再生;分别以0.6 mol/L KCl、0.3 mol/L KCl+0.3 mol/L蔗糖、0.6 mol/L蔗糖作为稳定剂,原生质体的再生率分别为10.9%、19.6%、25.9%.结论认为,YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌,在培养基中添加终质度浓度为10mg/mL的甘氨酸培养16 h后,再将菌体置于含有0.05mol/LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30 min,用10 mg/mL溶菌酶,30℃酶解60 min,再用0.6 mol/L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂,比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生.这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数.

作 者： 张琇 孙谧 王清印 李国保 ZHANG Xiu SUN Mi WANG Qing-yin LI Guo-bao   作者单位： 张琇,ZHANG Xiu(中国水产科学研究院,黄海水产研究所,山东,青岛,266071;中国海洋大学,海洋生命学院,山东,青岛,266003)

孙谧,王清印,SUN Mi,WANG Qing-yin(中国水产科学研究院,黄海水产研究所,山东,青岛,266071)

李国保,LI Guo-bao(上海水产大学,食品学院,上海,200090) 

刊 名： 中国水产科学  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERY SCIENCES OF CHINA  年，卷(期)： 2006 13(1)  分类号： Q932 Q938.8  关键词： 原生质体的制备与再生   低温碱性蛋白酶   YS-9412-130菌  

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