獐ISSR-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选

獐ISSR-PCR反应体系的建立与优化及引物筛选

利用正交试验L16(45)对影响獐(Hydropotes inermis)ISSR-PCR反应的Taq DNA聚合酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度及模板DNA浓度5个因素在4个水平上进行优化,同时对退火温度进行梯度PCR反应,以建立适合于獐ISSR-PCR反应的最佳体系.最终确定獐25μL ISSR-PCR反应体系为:Taq酶1.25 U·25μL-1、Mg2+浓度2.5 mmol·L-1、引物浓度0.3 μmol·L-1、DNA模板量350 ng·25μL-1、dNTP浓度0.15 mmol·L-1.在此基础上,利用优化的反应体系成功筛选出10条用于獐相关研究的ISSR引物并确定了各自的最佳退火温度,为今后利用ISSR技术进行獐的物种鉴定与分类、亲缘关系、系统发育和生理病理学研究奠定了技术基础,也为开展其它大型资源动物如黑麂的保护遗传学研究提供理论基础.

作 者： 张龙龙 鲍毅新 于华会 许婧 孙波 ZHANG Long-long BAO Yi-xin YU Hua-hui XU Jing SUN Bo   作者单位： 张龙龙,鲍毅新,许婧,孙波,ZHANG Long-long,BAO Yi-xin,XU Jing,SUN Bo(浙江师范大学生态研究所,金华,321004)

于华会,YU Hua-hui(中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江,富阳,311400) 

刊 名： 生态科学  英文刊名： ECOLOGICAL SCIENCE  年，卷(期)： 2009 28(4)  分类号： Q953 Q959.842  关键词： 獐   正交试验   ISSR   引物筛选  

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