喙尾琵甲DNA提取方法比较与AFLP反应体系的建立

喙尾琵甲DNA提取方法比较与AFLP反应体系的建立

采用CTAB法、改进SDS-蛋白酶K法、SDS-饱和氯化钠法和提取试剂盒对喙尾琵甲的肌肉、虫卵和幼虫进行DNA提取,比较了DNA的提取和保存质量,并对AFLP试验的酶切时间、预扩增产物稀释倍数和选择性扩增引物量等关键因子进行试验和优化.结果表明:4种方法对肌肉组织提取的DNA质量都较好;3种传统方法提取的DNA的保存时间长于试剂盒提取的DNA;使用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ内切酶组合,10 U EcoR Ⅰ和2 U Mse Ⅰ分两步各酶切2 h,T4连接酶3 h连接后,以20倍稀释的预扩增产物和5 ng/35 ng的E+3/M+3引物量进行选择性扩增,建立了喙尾琵甲AFLP分子标记体系.

作 者： 赵敏 冯颖 和锐 陈晓鸣 冀焕红 ZHAO Min FENG Ying HE Rui CHEN Xiao-ming JI Huan-hong   作者单位： 中国林业科学研究院资源昆虫研究所,国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室,云南,昆明,650224  刊 名： 林业科学研究  ISTIC PKU 英文刊名： FOREST RESEARCH  年，卷(期)： 2010 23(2)  分类号： Q963  关键词： 喙尾琵甲   基因组DNA   DNA提取   AFLP   Blaps rhynchopetera   genomic DNA   DNA extraction   AFLP  

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