抗菌抗癌肽CM4N在大肠杆菌中的融合表达与活性鉴定
为探讨内含肽intein在抗菌肽表达与纯化中的应用,采用递归PCR法合成CM4末端添加Asn的基因CM4N,克隆至E.coli表达载体pTYB11中,构建了与intein的C端融合的表达载体pTYYB11-CM4N.重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,融合蛋白intein-CM4N主要以可溶形式存在于胞内.利用载体中intein中的chitin结合域,将融合蛋白通过chitin亲和层析一步纯化,经DTT诱导intein的自我切割活性,实现CM4N在亲和柱上的切割与分离,透析冻干后得到了纯度95%以上的重组CM4N.活性检测结果显示,重组CM4N具有抗大肠杆菌、沙门氏菌和K562肿瘤细胞的活性.研究认为,内含肽在抗菌肽的基因工程中可能具有重要的应用前景.
作 者： 陈玉清 秋雯 焦波 张杰 张双全 CHEN Yu-qing QIU Wen JIAO Bo ZHANG Jie ZHANG Shuang-quan 作者单位： 南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学生物技术重点实验室,江苏南京210046 刊 名： 药物生物技术 ISTIC 英文刊名： PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2008 15(3) 分类号： Q516 关键词： 抗菌肽CM4 原核表达 intein融合 活性