Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定
目的 构建志贺毒素1-A亚单位(Stxl-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以大肠埃希菌0157 DNA为模板扩增Stxl-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌B121(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶协鉴定和测序分析后证实构建成功.重组蛋白经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stxl-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带.结论 成功构建了pET32a(+)/Stxl-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stxl-A蛋白,为进一步制备抗Stxl-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础.
作 者： 葛以跃 崔仑标 史智扬 焦永军 曾晓燕 戚宇华 唐震 单云峰 吴涛 汪华 GE Yiyue CUI Lunbiao SHI Zhiyang JIAO Yongjun ZENG Xiaoyan QI Yuhua TANG Zheng SHAN Yunfeng WU Tao WANG Hua 作者单位： 江苏省疾病预防控制中心微生物检验科,南京市,210009 刊 名： 医学分子生物学杂志 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2008 5(4) 分类号： Q786 关键词： 大肠埃希菌O157 志贺样毒素 质粒的构建与鉴定 原核表达