Akt1与凋亡诱导因子AIF相互作用的研究
目的 确定Akt1与凋亡诱导因子AIF是否存在相互作用及其可能的作用方式.方法 从成人肝cDNA文库中扩增获得Akt1和AIF基因,构建融合Flag标签的Akt1(pFlag-Akt1)和融合Myc标签的AIF(pMyc-AIF)真核表达重组质粒,转染细胞后通过免疫共沉淀反应,检测二者在体内的结合情况;构建融合GST标签的AIr原核表达重组质粒,诱导表达并纯化后获得融合蛋白GST-AIF,通过GST-pull down实验检测GST-AIF与融合Flag标签的Akt1蛋白在体外的结合情况;构建融合GFP标签的AIF的真核表达重组质粒,转染细胞,观察在凋亡信号刺激下AIF的转位情况,及Akt1的活化对该过程的影响.结果 察Akt1可与AIF在细胞内、外结合,且活化的Akt1对AIF在凋亡信号刺激下的核转位具有抑制作用.结论 活化的Akt1可能通过抑制AIF在凋亡信号刺激F的核转位过程而发挥其抗凋亡活性.
