猪丹毒丝菌C43065株表面保护性抗原A N端保护区在大肠杆菌中的表达
目的:在大肠杆菌中表达猪丹毒丝菌C43065株表面保护性抗原A(SpaA)N端保护区(SpaA-N),并检测其抗原性.方法:利用PCR方法从猪丹毒丝菌C43065株基因组中扩增出spaA基因片段,构建pMD18-spaA重组质粒并对插入片段进行测序;以pMD18-spaA重组质粒为模板,PCR扩增得到spoA-N基因片段,构建重组表达质粒pGEX-spaA-N,经序列测定证实正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),再经IFrG诱导表达GST-SpaA-N融合蛋白并纯化.结果:扩增得到的spaA基因长1 881 bp,编码由626个氨基酸残基构成的多肽;SDS-PAGE和Western印迹检测结果表明,诱导表达获得相对分子质量约64 000的GST-SpaA-N融合蛋白,该融合蛋白能与相应抗体发生特异性反应.结论:获得了在大肠杆菌中可溶性表达的GST-SpaA-N融合蛋白,为进一步研究猪丹毒丝菌免疫保护性抗原奠定了基础.
作 者： 吾鲁木汗·那孜尔别克 张磊 何翠 彭清静 恩特马克·布拉提白 Wulumuhan Nazierbieke ZHANG Lei HE Cui PENG Qing-Jing Entomack Borrathybay 作者单位： 吉首大学,生物资源与环境科学学院,省部共建生物工程实验室,湖南,吉首,416000 刊 名： 生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2008 19(4) 分类号： Q78 关键词： 猪丹毒丝菌 表面保护性抗原A 原核表达 抗原性