微柱液相色谱-电喷雾串联质谱检测多磷酸化肽位点
基于碱性磷酸酶的去磷酸化作用,发展了一种可改善多磷酸化肽电喷雾质谱检测效果的技术.将β-酪蛋白酶解产物用TiO2柱富集后,用碱性磷酸酶进行处理,并经微柱液相色谱分离后采用串联质谱进行鉴定.通过谱图中存在相对分子质量与根据氨基酸序列预计的单磷酸化肽相差80的色谱峰,可以证实样品中含有单磷酸化肽.此外,经碱性磷酸酶处理后的样品的色谱峰数目的增加,说明样品中可能存在多磷酸化肽段.通过控制去磷酸化反应的程度,使四磷酸化肽的部分磷酸基团被去除,从而可以推断其中3个磷酸化位点可能处于氨基酸残基序列的第17、18和19位.
作 者： 王晖 段继诚 袁辉明 张丽华 张维冰 张玉奎 WANG Hui DUAN Jicheng YUAN Huiming ZHANG Lihua ZHANG Weibing ZHANG Yukui 作者单位： 王晖,段继诚,袁辉明,WANG Hui,DUAN Jicheng,YUAN Huiming(中国科学院大连化学物理研究所,国家色谱研究分析中心,辽宁,大连,116023;中国科学院研究生院,北京,100039)张丽华,张维冰,张玉奎,ZHANG Lihua,ZHANG Weibing,ZHANG Yukui(中国科学院大连化学物理研究所,国家色谱研究分析中心,辽宁,大连,116023)
刊 名： 色谱 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY 年，卷(期)： 2007 25(4) 分类号： O658 关键词： 微柱液相色谱 电喷雾串联质谱 多磷酸化肽 磷酸化位点 碱性磷酸酶