微柱液相色谱-电化学法检测鼠纹状体单胺类物质的含量
单胺类神经递质(Monoamines), 包括儿茶酚胺(Catecholamine)和5-羟色胺(Serotonin), 在中枢神经系统中起重要作用. 对其含量的准确测定在基础研究和临床诊断中均具有重要的意义. 微透析是20世纪80年代发展起来的活体取样技术[1], 为脑功能的研究提供了极为有力的手段, 本实验室在此方面进行了多年的研究[2,3]. 微透析与液相色谱电化学检测联用[4], 可测定神经细胞外液递质的含量及释放量, 据此可对一系列重要的生理、病理和药理现象做出解释. 但使用常规高效液相色谱柱(?=4.6 mm i.d.)尚存在不足之处. 首先, 透析液中神经递质的浓度很低, 接近甚至低于检测器的浓度检出限; 其次, 为使样品得到较好检测, 需加大进样量(通常需25 μL), 从而需更长的取样时间, 使得方法的时间分辨率降低, 难以反映体内的动态变化. 为克服这些缺点, 近年来, 微柱液相色谱电化学检测(Microbore HPLC-ECD)技术受到了重视[5], 高效微径柱的使用大大降低了峰展宽效应, 抑制了组分的稀释, 极大地提高了检测灵敏度. 同时, 进样量的降低也使得时间分辨率得以提高(进样量为1～5 μL, 相当于采样时间1～5 min), 使以分钟为单位的动态检测成为可能. 本文采用Microbore HPLC-ECD的方法, 建立了测定鼠脑纹状体内DA, DOPAC, 5-HIAA和HVA含量的方法, 实现了采样间隔为5 min的动态检测.
