利用温控载体构建碱性果胶酯裂解酶工程菌
从筛选出的Bacillus subtilis WSHB04-02菌株中扩增出编码碱性果胶酯裂解酶的结构基因PL,将其插入载体pET22b(+)多克隆位点,得到带有前导序列PelB重组质粒pET22b(+)PL.以pET22b(+)PL为模板扩增出带前导序列的碱性果胶酯裂解酶的结构基因PL,将其插入温控载体pHsh,重组载体在大肠杆菌JM109中得到表达.其表达量与以T7为启动子的重组菌BL21DE3[(pET22b(+)PL]相比,表达量相近.SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量均为43kDa,同核酸序列测定所推导的值相符.研究表明利用pHsh构建的JM109(pHsh PL)诱导表达好,诱导方式简单廉价,这对该酶的大规模发酵具有重要意义.
作 者： 诸葛斌 堵国成 沈微 诸葛健 陈坚 唐雪明 王春 ZHUGE Bin DU Guo-cheng SHEN Wei ZHUGE Jian CHEN Jian TANG Xue-ming WANG Chun 作者单位： 江南大学生物工程学院环境生物技术研究室,工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214036 刊 名： 微生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 46(4) 分类号： X172 关键词： 碱性果胶酯裂解酶 pHsh 基因 表达