大鼠对氧磷酶1真核表达载体的构建及在体外的表达
目的 构建大鼠对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)真核表达载体,并检测其在体外培养细胞中的表达及功能,为进一步探索运用其进行基因防治肺部感染奠定基础.方法 利用RT-PCR扩增大鼠PON1编码区全长序列,克隆入pcDNA 3.1(+),鉴定无误后,脂质体转染A549细胞及293细胞, Western印迹检测蛋白表达,并检测其芳香酯酶活性及对铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能.结果 分别从大鼠肝组织中扩增出1 153 bp片段,克隆入表达载体后进行酶切鉴定和测序结果正确.转染细胞后能够表达目的 蛋白,该蛋白具有芳香酯酶和AHLs内酯酶活性.结论 成功构建了含有大鼠PON1真核表达载体,质粒能够在真核细胞中表达,能够有效地水解铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子.
作 者： 杨硕 熊盛道 熊维宁 许淑云 史雪梅 徐国鹏 兰芬 陆小霞 胡琼洁 YANG Shuo XIONG Shengdao XIONG Weining XU Shuyun SHI Xuemei XU Guopeng LAN Fen LU Xiaoxia HU Qiongjie 作者单位： 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科,卫生部呼吸病重点实验室,武汉市,430030 刊 名： 医学分子生物学杂志 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2008 5(3) 分类号： Q784 关键词： 铜绿假单胞菌 对氧磷酶 密度感知 基因的表达与调控