核蛋白提取方法
核蛋白提取试剂盒
产品组成：
产品组成 规格 提取液A 提取液B 蛋白酶抑制剂混合物 磷酸酶抑制剂混合物
BB-3102-1
50T 10ml 10ml 250ul 250ul
BB-3102-2 100T 20ml 20ml 500ul 500ul
储存条件：
蛋白提取液，磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：
一年。
产品简介：
贝博核蛋白提取试剂盒提供配套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
应用示例：
1 2 3
图片说明：用核蛋白提取试剂盒提取大肠组织样本的SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。图1泳道中1、2、3分别为Marker、胞浆蛋白、核蛋白样本。图2为以上样品的GAPDH内参的WB结果照片。
使用方法：
细胞蛋白提取
1. 提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液A和B中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混
合物和磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
①
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，
尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 4. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，
置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。
5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80
℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟，弃上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。 9. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。 10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
②③
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织蛋白提取
1. 提取液制备：每200ul冷的'蛋白提取液A和B中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混
合物，混匀后置冰上备用。
①
2. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或
用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。 3. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。
4. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，
置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。。
5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80
℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，12000×g条件下离心5分钟，弃上清。 8. 在沉淀中加入200μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒。 9. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。 10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
②③
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
参考文献：
● Guang Yu, Tonghai Yan et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of
I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）
● Xiaoling Ma et al. Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces
Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils PloS one 2012 （IF=4.411）
● Jinchun Qian et al. Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, Pages 438-445 （IF=2.466）
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产品号 BB-3101 BB-3102 BB-3411 BB-3501 BB-3121 BB-3122 BB-3123 BB-3125 BB-3105 BB-3702
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产品号 BB-3108 BB-3103 BB-3401 BB-3721 BB-3151 BB-3124 BB-3152 BB-3301 BB-3311 BB-3703
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