粪肠球菌中具有启动功能的DNA片段的捕获及鉴定
PCR扩增来自质粒pUC119的β-内酰胺酶基因(bla)作报告基因,克隆进质粒pNZ8037上的能被Nisin诱导的启动子PnisA下游,构建了粪肠球菌启动功能片段探测载体pNZ-bla.利用该探测载体从粪肠球菌染色体总DNA中克隆到了能在粪肠球菌中表达的一系列具有启动功能的DNA片段,将包含克隆片段的pNZ-P-bla6质粒电击转化粪肠球菌,培养转化子并检测其抗氨苄强度,结果表明其抗氨苄强度大于Nisin诱导的含pNZ-bla质粒的粪肠球菌.表明克隆的功能片段启动能力强于PnisA.在pNZ-P-bla6的启动功能片段下游Sau3AⅠ和EcoRⅠ之间接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建表达绿色荧光蛋白的质粒载体pNZ-P-gfp并导入粪肠球菌中,共聚焦显微镜下可以观察到绿色荧光蛋白的表达.
作 者： 黄路标 张伯生 任大明 HUANG Lu-biao ZHANG Bo-sheng REN Da-ming 作者单位： 复旦大学,生命科学学院,遗传学研究所,遗传工程国家重点实验室,上海,200433 刊 名： 复旦学报（自然科学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)： 2006 45(3) 分类号： Q781 关键词： 乳酸菌 粪肠球菌 启动子 克隆载体 GFP