重组人β干扰素在DHFR--CHO细胞中的高效表达
目的 由二氢叶酸还原酶缺陷型的中国仓鼠卵巢(DHFR--CHO)细胞高效表达重组人β干扰素(rhIFN-β),比较来源于E.coli、Yeast和CHO细胞的IFN-β抗增殖活性.方法 采用PCR技术,从pLG104R载体中扩增目的 基因,经XhoⅠ和SmaⅠ双酶切后克隆到真核表达载体pCI-dhfr中,采用阳离子脂质体介导方法,将构建的表达载体转染到CHO细胞中.通过MTX的加压筛选,以病毒诱导的细胞病变抑制(CPEI)法进行活性定量检测,获得稳定、高效表达rhIFN-β的CHO细胞株,并扩大培养.分离纯化后,定量并鉴定表达产物.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法比较E.coli、Yeast和CHO细胞表达体系所生产的rhIFN-β的抗增殖活性.结果 得到由CHO细胞株表达的rhIFN-β纯品,且抗增殖活性显著高于其他2个表达体系.结论 CHO细胞可大规模生产rhIFN-β,且活性高于其他表达体系,显示了以CHO细胞为生产平台的优越性.
作 者： 史艳秋 陈畅 顾黎 邹思湘 宋静 王鹏 SHI Yan-qiu CHEN Chang GU Li ZOU Si-xiang SONG Jing WANG Peng 作者单位： 史艳秋,SHI Yan-qiu(南京农业大学,动物医学院,江苏,南京,210095;山东大学,微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250100)陈畅,顾黎,宋静,王鹏,CHEN Chang,GU Li,SONG Jing,WANG Peng(山东大学,微生物技术国家重点实验室,山东,济南,250100)
邹思湘,ZOU Si-xiang(南京农业大学,动物医学院,江苏,南京,210095)
刊 名： 中国生化药物杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS 年，卷(期)： 2006 27(3) 分类号： Q786 R512.6+2 关键词： 中国仓鼠卵巢细胞 β干扰素 真核表达 抗增殖活性