细菌内同源重组法制备FMDV聚蛋白编码基因重组腺病毒
采用PCR方法从重组质粒pMD18-T/PP中扩增出FMDV的聚蛋白(PP)编码基因,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成重组穿梭质粒rpAd-CMV/PP;将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体通过在大肠杆菌内质粒间同源重组获得重组腺病毒质粒rpAd/PP.将腺病毒载体线性化后用脂质体介导转染293细胞从而获得含有口蹄疫病毒PP编码基因的重组腺病毒.通过倒置显微镜观测,可见明显的细胞病变,利用荧光显微镜可观测到报告基因绿色荧光蛋白的表达,并在电镜下观察到FMDV的空衣壳.结果证明已成功获得了含有口蹄疫病毒PP编码基因的重组腺病毒rAd/PP,并成功表达组装FMDV空衣壳,为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础.
作 者： 张兴旺 王勤 柳纪省 殷相平 李志勇 ZHANG Xing-wang WANG Qin LIU Ji-xing YIN Xiang-ping LI Zhi-yong 作者单位： 张兴旺,ZHANG Xing-wang(中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046;兰州大学生命科学学院,兰州,730000;甘肃省人民医院检验中心,兰州,730000)王勤,WANG Qin(兰州大学生命科学学院,兰州,730000)
柳纪省,殷相平,李志勇,LIU Ji-xing,YIN Xiang-ping,LI Zhi-yong(中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州,730046)
刊 名： 微生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2006 46(2) 分类号： Q786 S852 关键词： FMDV 聚蛋白 编码基因 同源重组 重组腺病毒 空衣壳