人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定
目的 构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况.方法 采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HepG2细胞感染效率的监测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010 pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010 pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力.结论 应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体.
作 者： 蒋春华 高钰琪 黄庆愿 黄缄 贺伟峰 段小军 JIANG Chun-hua GAO Yu-qi HUANG Qing-yuan HUANG Jian HE Wei-feng DUAN Xiao-jun 作者单位： 蒋春华,高钰琪,黄庆愿,黄缄,JIANG Chun-hua,GAO Yu-qi,HUANG Qing-yuan,HUANG Jian(第三军医大学,高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室,全军高原医学重点实验室,重庆,400038)贺伟峰,HE Wei-feng(第三军医大学,西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038)
段小军,DUAN Xiao-jun(第三军医大学,西南医院骨关节中心,全军矫形外科中心,重庆,400038)
刊 名： 第三军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 2006 28(20) 分类号： Q782 Q789 关键词： 腺病毒 HIF-1α基因 同源重组