粪肠球菌Ace重组蛋白的表达、纯化及黏附活性研究
构建含粪肠球菌表面蛋白Ace保守序列A的重组载体,在大肠埃希菌M15中进行诱导表达、纯化表达产物,研究其黏附活性.以粪肠球菌标准株JB2-2为模板进行PCR扩增ace基因保守序列A,构建重组质粒pQE30/Ace,转化至表达宿主菌M15中进行诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot进行分析和鉴定表达结果,Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,同时用纯化的Ace重组蛋白免疫新西兰兔,用所得相应的抗血清分别进行黏附和黏附抑制实验.结果可见,构建的重组质粒经酶切鉴定和测序鉴定证明其中插入片段为ace基因保守序列A,测序结果与Genbank上登录序列完全一致;SDS-PAGE分析显示,重组工程菌表达了一相对分子质量(Mr)约为37 ku的目的蛋白条带,Western blot检测其能与6×His单克隆抗体发生特异性反应.粪肠球菌JH2-2能够黏附于胶原蛋白Ⅰ表面;抗Ace多克隆抗体可抑制46℃培养的JH2-2对胶原蛋白Ⅰ的黏附,这种抑制作用与其稀释度呈负相关.构建的原核表达载体pQE30/Ace在E.coli M15中成功地表达,纯化的重组Ace蛋白具有胶原黏附活性.
颜向军,刘亚琴,邹礼衡,YAN Xiang-jun,LIU Ya-qin,ZOU Li-heng(南华大学,附属第一医院血液科,湖南,衡阳,421001)
刊 名： 微生物学杂志 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MICROBIOLOGY 年，卷(期)： 2008 28(3) 分类号： Q939.93 关键词： 粪肠球菌 Ace 重组蛋白 蛋白纯化 黏附