苦瓜MAP30基因的毕赤酵母表达载体构建及重组菌株的筛选
目的:从苦瓜中克隆MAYO全长基因,并将该基因连接至表达载体pPIC9中,建立酵母菌落PCR筛选方法.方法采用改良SDS法从苦瓜表皮中提取基因组DNA,设计特异件的引物,通过PCR技术扩增出全长861bp的MAP30基因.该基因经Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,连接至毕赤酵母表达载体pPIC9中.重组载体转化GS115菌株,运用菌落PCR鉴定重组菌株.结果:基因测序表明,该基因已成功插入酵母表达载体pPIC9α-factor分泌信号下游,同源性分析表明该基因与GeneBank(AF284811)的核骨酸同源性达99.9%,氨基酸同源性达100%.菌落PCR显示外源基因已整合人酵母GS115菌株中.结论:成功地克隆了MAP30全长基因,并构建了含MAP30基因的重组毕赤酵母表达载体,并获得了整合菌株,为下一步研究奠定了基础.
作 者： 杨威威 沈晓晓 郑珍珍 朱振洪 作者单位： 浙江中医药大学生物工程学院,浙江杭州,310053 刊 名： 生物技术 PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2010 20(2) 分类号： Q782 Q784 关键词： 苦瓜 MAP30 毕赤酵母 表达载体 Momordica charantia L MAP30 Pichia pastoris expression vector