靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建
目的:利用pSUPER载体构建针对人核因子E2 p45相关因子2(Nrf2)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究Nrf2基因在结肠癌化学预防中的作用奠定实验基础.方法:设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,构建重组载体pSUPER-Nrf2转染人结肠癌HT-29细胞.同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48h后G418筛选稳定表达的细胞.RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞Nrf2基因的表达,观察稳定筛选出的细胞中UGT1A基因mRNA水平的表达变化.结果:成功构建RNA干扰真核表达载体pSU-PER-Nrf2.转染后24～96 h,荧光显微镜及FCM检测显示转染效率为30%～75%.瞬时转染pSUPER-Nff2-A2,pSUPER-Nrf2-B2重组质粒Nrf2 mRNA的表达差异无显著性(P＞0.05);瞬时转染72 h及稳定转染后,pSUPER-Nrf2-A1,pSUPER-Nrf2-B1可显著抑制Nrf2基因的表达.RT-PCR检测显示,稳定筛选出的细胞中UGT1A表达水平降低(P＜0.05).结论:成功构建了Nrf2的RNA干扰表达载体,筛选并获得低表达Nrf2基因的稳定克隆,筛选出的细胞UGT1A表达水平明显降低,表明Nrf2可能对UGT1A酶的表达具有调节作用.
作 者： 杨晓云 李延青 梁晓红 郭玉婷 袁俊华 张燕 朱强 YANG Xiao-yun LI Yan-qing LIANG Xiao-hong GUO Yu-ting YUAN Jun-hua ZHANG Yan ZHU Qiang 作者单位： 杨晓云,李延青,郭玉婷,袁俊华,张燕,朱强,YANG Xiao-yun,LI Yan-qing,GUO Yu-ting,YUAN Jun-hua,ZHANG Yan,ZHU Qiang(山东大学,齐鲁医院消化内科,山东,济南,250012)梁晓红,LIANG Xiao-hong(山东大学,免疫学研究所,山东,济南,250012)
刊 名： 山东大学学报（医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 44(4) 分类号： Q786 关键词： 基因,Nrf2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 RNA干扰 结肠肿瘤