CHO细胞高效表达载体的优化
目的:研究分析中国仓鼠EF1-α基因的转录调控序列,以构建新型高效表达载体.方法:利用常规分子生物学技术,构建了一系列基于CHEF1-α基因的非翻译区调控序列元件的新型真核表达载体.以组织型纤溶酶原激活剂突变体(k2tPA)作为报告基因,利用本室已建立的CHO-dhfr--Z+定点整合表达系统比较载体表达外源基因的能力,挑选表达量高的载体.进一步添加翻译增强子(H213及V163)序列,再进行评价.结果:CHEF1-α5'UTR及启动子+3'UTR 1.65 kb、CHEF1-α5'UTR及启动子+3'UTR 2.7 kb这2种组合均可有效提高目的基因tPA的表达,表达效率与对照载体相比分别提高了65.9%和54.5%.在添加翻译增强子V163后,载体pMCEdEF53Ⅲ-163frt-k2tPA的表达效率为对照载体的2.65倍.结论:该载体系统在重组蛋白药物的研发方面具有良好的应用前景.
作 者： 刘珊 刘志刚 张国强 俞炜源 LIU Shan LIU Zhi-Gang ZHANG Guo-Qiang YU Wei-Yuan 作者单位： 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 刊 名： 军事医学科学院院刊 ISTIC PKU 英文刊名： BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES 年，卷(期)： 2006 30(4) 分类号： Q786 关键词： CHEF1-α基因 CHO/dhfr-细胞 基因表达 组织型纤溶酶原激活物