南极冰藻 Chlamydomonas sp.ICE-L的 cDNA文库构建及品质检测
为构建南极冰藻 Chlamydomonas sp.ICE-L的cDNA文库,提取对数生长期南极冰藻ICE-L的总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA; 再以第一链cDNA 产物为模板,用LD-PCR合成第二链cDNA.该cDNA产物经分级分离转入大肠杆菌中,即获得南极冰藻ICE-L的cDNA原始文库,其滴度为1.6×10 6 cfu/mL.扩增后的cDNA 文库的滴度为1.0×10 10 cfu/mL.用PCR方法测得文库的重组率大于97 % ,插入cDNA的长度为0.5～1.8 kb,0.9 kb以上插入片段占50 %以上.取适量扩增文库稀释并铺平板,挑取72个独立菌落,对其中22个独立菌落所插入的cDNA进行测序,克隆到了一个具有5'和3'非编码区的40S ribosomal protein S5全长基因序列,GenBank收录号为AM167929.
作 者： 王能飞 沈继红 金治平 赵爱云 林学政 WANG Neng-fei SHEN Ji-hong JIN Zhi-ping ZHAO Ai-yun LIN Xue-zheng 作者单位： 王能飞,沈继红,林学政,WANG Neng-fei,SHEN Ji-hong,LIN Xue-zheng(国家海洋局,第一海洋研究所,山东,青岛,266061;国家海洋局,海洋生物活性物质重点实验室,山东,青岛,266061;青岛市天然产物研究开发实验室,山东,青岛,266061)金治平,JIN Zhi-ping(清华大学,生物系,北京,100084)
赵爱云,ZHAO Ai-yun(青岛大学,天然色素研究所,山东,青岛,266071)
刊 名： 海洋科学进展 ISTIC PKU 英文刊名： ADVANCES IN MARINE SCIENCE 年，卷(期)： 2006 24(4) 分类号： Q949.2 关键词： PCR 南极冰藻 Ribosomal protein S5 cDNA 文库