一种通用高效的复杂载体构建的新方法
文章报道了一种简便、通用、高效的复杂载体构建方法.此法是在PCR引物设计时,在目的片段5′端加上随机设计的接头,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性处理PCR克隆目的片段,产生多个首尾相匹配的黏性末端,进行多片段定向连接、转化、重组子鉴定.以7片段拼接的水稻单交换质体定点整合表达载体pRSMGA的构建为例,应用上述方法构建只需做两次连接、转化,且其重组、转化效率高.数10次实验证明:这是一种简便、通用、高效的复杂构建载体的方法,该法至今尚未见报道.
作 者： 陆云华 马立新 蒋思婧 LU Yun-Hua MA Li-Xin JIANG Si-Jing 作者单位： 陆云华,LU Yun-Hua(湖北大学生命科学院分子微生物与基因工程实验室,武汉,430062;宜春学院生物工程系,江西,宜春,336000)马立新,蒋思婧,MA Li-Xin,JIANG Si-Jing(湖北大学生命科学院分子微生物与基因工程实验室,武汉,430062)
刊 名： 遗传 ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING) 年，卷(期)： 2006 28(2) 分类号： Q78 关键词： 复杂载体构建 新方法 T4 DNA聚合酶 水稻