抗人精浆蛋白/抗CD3双特异性单链抗体的活性研究
目的: 构建并表达抗人精浆蛋白/抗CD3的双特异性单链抗体(BsscFv),并检测其生物学活性.方法: 利用重叠延伸拼接PCR,拼接抗人精浆蛋白scFv基因和抗CD3 scFv基因,并在中间引入柔性短肽(GlySerGly)2,构建抗人精浆蛋白/抗CD3的BsscFv基因.测序正确后,将融合基因亚克隆入真核表达载体中,并在HeLa细胞中进行表达,采用流式细胞术(FCM)和 51Cr释放试验,评价BsscFv的抗原结合活性和体外介导的特异性杀伤靶细胞的效应,以及利用裸鼠前列腺癌模型观察其在体内的抑瘤作用.结果: 测序分析证实,BsscFv基因片段的大小为1.5 kb,编码500个氨基酸,该序列与设计的完全一致.SDS-PAGE和Western blot分析证明: 表达产物存在于HeLa细胞的培养上清中,其相对分子质量(Mr)为61 000.FCM结果显示: BsscFv可特异性的结合前列腺癌细胞LNCaP和CD3+淋巴瘤细胞Jurkat,结合率分别为54.1%和53.7%.体外实验表明,BsscFv可介导CTL对LNCaP细胞的杀伤.与对照组相比较,接种LNCaP的裸鼠在体内注射激活的CTL和BsscFv治疗后,肿瘤的生长明显受到抑制(P<0.05).结论: 抗人精浆蛋白/抗CD3的BsscFv具有一定的生物学活性,在体内、体外均可介导CTL杀伤靶细胞LNCaP.
王禾,武国军,WANG He,WU Guo-jun(第四军医大学西京医院泌尿外科,陕西,西安,710032)
刊 名： 细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(4) 分类号： Q789 关键词： 前列腺肿瘤 CD3 单链抗体 双特异性抗体