大黄鱼(Pseudosciaena crocea)热激蛋白的基因克隆、原核表达及抗血清的制备
应用trizol裂解法提取象山港网箱养殖大黄鱼肝脏总RNA,采用RT-PCR获得大黄鱼cDNA;通过设计特异引物进行PCR扩增,将PCR产物转化到质粒并直接测序,得到1.7kb的目的基因;同时将此目的基因连接到表达质粒pSBET中,在大肠杆菌BL21中进行诱导表达以及表达产物的分析.克隆基因的表达产物经SDS-PAGE分析表明,HSP基因的蛋白分子量为60kDa左右,与阅读框的编码大小一致;表达蛋白经纯化后免疫小鼠制备抗血清.Western blotting检测结果表明,制备的抗血清与HSP蛋白起较强的特异性反应.HSP基因的系统进化分析表明,大黄鱼与非洲爪蟾最为接近,从侧面印证了脊椎动物中两栖纲动物与鱼纲动物的亲源关系.通过大黄鱼HSP基因的提取和分析,可为以后制备出核酸探针、筛选和克隆出一批具有优良性状的基因、构建基因文库等研究工作奠定基础.
作 者： 张祖兴 李明云 陈炯 邬勇 ZHANG Zu-Xing LI Ming-Yun CHEN Jiong WU Yong 作者单位： 张祖兴,李明云,邬勇,ZHANG Zu-Xing,LI Ming-Yun,WU Yong(宁波大学生命科学与生物工程学院,宁波,315211)陈炯,CHEN Jiong(浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所,杭州,310021)
刊 名： 海洋与湖沼 ISTIC PKU 英文刊名： OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA 年，卷(期)： 2006 37(4) 分类号： Q95 关键词： 大黄鱼 热激蛋白基因 原核表达 抗血清