磁珠富集法与小片段克隆法筛选鲤微卫星的比较研究

磁珠富集法与小片段克隆法筛选鲤微卫星的比较研究

用2种方法克隆黑龙江鲤(Cyprinus (Cyprinus) carpio haematopterus)的微卫星序列.这2种方法分别是:①经典的小片段DNA克隆库,用末端标记的[γ-32] ATP的CA重复序列为探针筛选;②将酶切获得的小片段DNA用结合有磁珠的并连接有15个CA重复序列的生物素进行富集,获得的含有CA重复的DNA片段并经过两次PCR扩增再克隆的方法获得富集微卫星片段的克隆库.从前一个方法的克隆库中筛选2000个菌落,获得阳性克隆45个,有22个含有微卫星,完美型的占63.6%,非完美型的占22.7%,混合型的占13.7%,重复次数超过10的有9个,占40.9%;从方法②的克隆库中筛选2600个菌落,获得阳性克隆1300个,测序其中的390个克隆,微卫星314个,完美型的占79.0%;非完美型的占14.3%;混合型的占6.7%,重复次数超过10的有293个,占93.3%.结果表明,用生物素结合磁珠富集法克隆微卫星效率高,成本低,所获微卫星质量高,是一种值得推荐的微卫星制备方法.

作 者： 孙效文 贾智英 魏东旺 鲁翠云 梁利群 SUN Xiao-wen JIA Zhi-ying WEI Dong-wang LU Cui-yun LIANG Li-Qun   作者单位： 中国水产科学研究院,黑龙江水产研究所,黑龙江,哈尔滨,150070  刊 名： 中国水产科学  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FISHERY SCIENCES OF CHINA  年，卷(期)： 2005 12(2)  分类号： Q959.468  关键词： 磁珠富集   小片段克隆   鲤   微卫星  

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