rhKPI/AβPP大规模发酵及纯化工艺
目的:在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效表达AβPP中的Kunitz型蛋白酶抑制剂的结构域(KPI/AβPP),利用80 L的发酵罐优化发酵条件,制备rhKPI/AβPP.方法:克隆kpi基因插入到pPICZα,构建真核表达载体pPICZα-kpi,经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33,筛选高表达rhKPI/AβPP工程菌.结果:筛选出的高表达工程菌采用80L发酵罐甲醇诱导补料批式发酵,在pH 3.3、纯氧浓度22%～30%、罐内压力为12psi、甲醇诱导60 h时产量1.0 g·L-1.纯化的rhKPI/AβPP经SDS-PAGE分析显示单一区带,相对分子质量6 750.质谱测定其相对分子质量为6 750,抑制胰蛋白酶的比活性为8.4 EPU·mg-1.结论:克隆、构建、筛选出高效表达rhKPI/AβPP的毕赤酵母工程菌,并建立了稳定的发酵和纯化工艺.
作 者： 贺巾超 杨莉莉 马杰 颜波群 韩树海 侯立中 颜炜群 HE Jin-chao YANG Li-li MA Jie YAN Bo-qun HAN Shu-hai HOU Li-zhong YAN Wei-qun 作者单位： 贺巾超,杨莉莉,马杰,韩树海,侯立中,颜炜群,HE Jin-chao,YANG Li-li,MA Jie,HAN Shu-hai,HOU Li-zhong,YAN Wei-qun(吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室,吉林,长春,130021)颜波群,YAN Bo-qun(吉林大学第四医院消化内科,吉林,长春,130011)
刊 名： 吉林大学学报（医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION) 年，卷(期)： 2006 32(2) 分类号： Q78 关键词： rhKPI/AβPP 毕赤酵母 发酵