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重组TRX-BNP融合蛋白的构建和表达
目的:构建人B型钠尿肽(BNP)表达质粒,用pET原核表达系统制备重组抗原TRX-BNP融合蛋白.方法:根据GenBank中检索到的人BNP成熟蛋白序列编码,设计合成编码BNP-32蛋白的DNA,并分别在5'端和3'端设计EcoR I和HindⅢ酶切位点,经聚合酶链反应(PCR)、构建重组质粒pET32a.BNP,并在BL21(DE3)经IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析制备TRX-BNP.通过DNA测序、融合蛋白的相对分子质量分析及Western印迹来鉴定TRX-BNP质粒及表达的BNP抗原的正确性.结果:DNA测序结果表明,所获得的BNP基因编码序列符合序列设计的要求,正确插入设计位点,重组质粒pET32a.BNP构建成功.IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示有特异性蛋白TRX-BNP表达,蛋白相对分子质量21 400,Ni-NTA亲和纯化,在UVP凝胶成像分析系统上作定量分析,BNP蛋白纯度达到95%.Western印迹结果证实TRX-BNP蛋白特异性表达.结论:成功制备TRX-BNP融合蛋白.
作 者： 游晓华 秦永文 黄盛东 袁扬 龚德军 作者单位： 游晓华,秦永文(第二军医大学长海医院心血管内科,上海,200433)黄盛东,袁扬,龚德军(长海医院胸心外科)
刊 名： 第二军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 2006 27(6) 分类号： Q781 关键词： B型钠尿肽 融合蛋白 硫氧还蛋白【重组TRX-BNP融合蛋白的构建和表达】相关文章：
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