层理鞭枝藻藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白β亚基Cys-155的藻胆色素共价偶联
层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus PCC7603)藻蓝蛋白β-CPC和藻红蓝蛋白β-PEC中均存在2个藻胆色素结合位点(cys-84和Cys-155),可与藻蓝胆素(简称PCB)发生共价偶联反应,已有研究证实编码基因为alr0617的裂合酶CpcS1是催化Cys-84与PCB共价偶联的裂合酶.在研究Cys-155与PCB共价偶联的过程中,通过BLAST软件同源性对比分析后,筛选出4个基因:cpcT1、cpcT2、cpcS1、cpcS,其中基因cpcT1和cpcS2,利用分子克隆的技术,根据实验需要转到载体pCDFDuet上,通过DNA电泳和蛋白质电泳挑选出正确的克隆.此4个基因对应的质粒与在大肠杆菌内生成PCB必需的质粒pACYCDuet-hol-pcyA,以及质粒pET-cpcB(C84S)或pET-pecB(C84A),共同转入大肠杆菌BL21(DE3)内,进行体内重组,得到各重组蛋白,经过亲和层析柱提纯并透析,过滤掉金属离子,纯化透析后的蛋白经过活性比较、蛋白质电泳以及锌染色、蛋白质变性等试验以及荧光和紫外吸收光谱等鉴定,通过与相应文献中PCB光谱的比对,确定编码基因为all5339的裂合酶CpcT1能高效地催化Cys-155与PCB共价偶联,而其余3个基因不能起到催化作用.由此,能催化脱辅基蛋白β-CPC和β-PEC的两个位点共价偶联PCB的裂合酶均被发现.实验对于研究藻胆蛋白的生物合成、光合作用捕光机理以及藻胆体的组装等有重要的意义.
作 者： 张娟 周可澄 夏坤 周明 ZHANG Juan ZHOU Ke-Cheng XIA Kun ZHOU Ming 作者单位： 张娟,周可澄,夏坤,ZHANG Juan,ZHOU Ke-Cheng,XIA Kun(华中科技大学环境科学与工程学院,武汉,430074)周明,ZHOU Ming(华中农业大学生命科学技术学院,武汉,430070)
刊 名： 水生生物学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)： 2010 34(2) 分类号： Q344~+.14 关键词： 藻蓝蛋白β-CPC 藻红蓝蛋白β-PEC 裂合酶CpcT1 体内重组 β-CPC β-PEC Lyase CpeT1 Reconstitution in vivo