基于新月柄杆菌RsaA外运机制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞

基于新月柄杆菌RsaA外运机制的EspA及EspA-IL-24融合蛋白胞外分泌表达研究

目的:实现大肠杆菌分泌蛋白(Esp)A及EspA与白细胞介素(IL)-24融合蛋白的胞外分泌表达,进一步验证基于新月柄杆菌RsaA外运机制的原核胞外分泌表达载体系统的有效性和通用性,并改造优化该系统.方法:利用分子克隆手段,按RsaA分泌系统操纵子组织方式,将获得的RsaA系统元件编码序列和异源调控序列克隆至pQE30骨架质粒,构建新的胞外分泌表达质粒pQABP2S;以大肠杆菌为宿主菌诱导表达EspA及EspA-IL-24融合蛋白,并通过Western blot检测目标蛋白在培养上清中的表达.结果:获得了新的胞外分泌表达载体pQABP2S;与对照相比,该载体宿主系统培养上清中目标蛋白EspA及EspA-IL-24的表达量明显增加.结论:在大肠杆菌中通过RsaA分泌系统可实现分子大小不同的EspA及EspA-IL-24融合蛋白的特异性分泌表达,进一步证实该分泌表达策略的有效性和通用性;调整调控序列以优化分泌系统的尝试,为此类基因工程技术平台的开发提供了借鉴.

作 者： 宁亚蕾 周立雄 毛旭虎 张卫军 程琰 余抒 邹全明 NING Ya-Lei ZHOU Li-Xiong MAO Xu-Hu ZHANG Wei-Jun CHENG Yan YU Shu ZOU Quan-Ming   作者单位： 宁亚蕾,毛旭虎,张卫军,程琰,余抒,邹全明,NING Ya-Lei,MAO Xu-Hu,ZHANG Wei-Jun,CHENG Yan,YU Shu,ZOU Quan-Ming(第三军医大学,临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038)

周立雄,ZHOU Li-Xiong(香港大学,医学院,香港) 

刊 名： 生物技术通讯  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分类号： Q78  关键词： 新月柄杆菌   RsaA分泌系统   大肠杆菌分泌蛋白A   白细胞介素-24   分泌表达   表达载体   大肠杆菌