人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达
目的 克隆人胸腺素α原/白介素2 融合基因,构建其原核表达载体并在大肠杆菌系统中有效表达.方法 采用RT-PCR方法,从人白血病细胞和人T淋巴细胞中分别扩增得到胸腺素α原/白介素2 基因,利用基因重组技术将融合基因片段重组于pET42a原核表达载体上,构建成pET42a-PI.经酶切、测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导蛋白表达.表达产物经离子交换和分子筛纯化后进行Western blot分析,通过人外周血单核细胞玫瑰花结实验对融合蛋白进行了初步的活性测定.结果 凝胶电泳显示PCR产物的长度约750 bp,测序结果表明,扩增片段与预期序列一致.重组菌在IPTG诱导下表达相对分子质量为28 kDa的蛋白,纯化后的融合蛋白能提高人外周血单核细胞玫瑰花结形成率,表明具有一定活性.结论 成功克隆和构建了人胸腺素α原/白介素2融合基因的原核表达载体,并在原核表达系统中得到有效表达.
作 者： 黄明 韦剑 周飞燕 HUANG Ming WEI Jian ZHOU Fei-yan 作者单位： 广州拜迪生物医药有限公司,广东,广州,511495 刊 名： 广东药学院学报 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY 年，卷(期)： 2008 24(3) 分类号： Q786 关键词： 胸腺素α原 白介素2 融合蛋白 表达