铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位DNA结合能力的测定
目的 检测铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶大亚单位与噬菌体基因组末端cos位点的结合能力.方法 通过PCR扩增出末端酶大亚单位编码基因tls,经pMD-T18载体克隆至表达载体pQE31上,IPTG诱导表达,获得包涵体蛋白,用包涵体裂解液溶解包涵体,通过Ni-NTA亲和层析,分离出重组目的蛋白rTLS,透析复性后,与生物素标记的基因组末端cos片段进行结合反应,通过EMSA检测DNA滞后现象.结果 成功构建了表达载体pQE-tls,获得了纯化的具有生物学活性的重组末端酶大亚单位rTLS,EMSA结果证实结合rTLS后的cos片段与无蛋白加入的对照组相比明显滞后.结论 重组噬菌体PaP3末端酶大亚单位在体外可与基因组末端cos片段发生特异性结合,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
作 者： 申晓冬 张克斌 李明 周莹冰 蹇锐 胡晓梅 陈志瑾 饶贤才 胡福泉 SHEN Xiao-dong ZHANG Ke-bin LI Ming ZHOU Ying-bing JIAN Rui HU Xiao-mei CHEN Zhi-jin RAO Xian-cai HU Fu-quan 作者单位： 申晓冬,李明,周莹冰,蹇锐,胡晓梅,陈志瑾,饶贤才,胡福泉,SHEN Xiao-dong,LI Ming,ZHOU Ying-bing,JIAN Rui,HU Xiao-mei,CHEN Zhi-jin,RAO Xian-cai,HU Fu-quan(第三军医大学,基础医学部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038)张克斌,ZHANG Ke-bin(第三军医大学,新桥医院医学实验技术中心,重庆,400037)
刊 名： 第三军医大学学报 ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)： 2006 28(22) 分类号： Q55 Q782 Q936 关键词： 末端酶大亚单位 噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达