高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究
甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物.目前,甘蔗分子生物学研究已成为甘蔗研究的热点之一.基因组DNA的提取是进行甘蔗分子生物学研究的基础.本研究设计含一系列SDS浓度的提取液,同时设加液氮和不加液氮研磨的对比试验,提取甘蔗不同部位叶片的基因组DNA并进行产量和纯度检测以及分子生物学分析.结果表明,所有提取液提取的甘蔗基因组DNA纯度均很高,A260/A280在1.8-2.0之间,A260/A230大于2,但提取液I(0.75% SDS)提取的甘蔗基因组DNA产量较低;加液氮与否对甘蔗基因组DNA的提取产量和纯度没有影响;以提取的甘蔗基因组DNA为模板,分别用一对扩增SPS(蔗糖磷酸合成酶)基因部分片段的引物和一对ISSR引物进行PCR扩增,所有DNA均能扩增出预期的条带;用不同的限制性内切酶对所提取的甘蔗基因组DNA进行酶切,所有DNA样品均能完全酶切.本研究得出最佳甘蔗基因组DNA提取方法如下:磨碎甘蔗叶片后,加DNA提取液(SDS: 1.5%;Tris: 100 mM;EDTA: 20 mM;NaCl: 500 mM)于65℃裂解30 min,经酚∶氯仿和氯仿各抽提一次,可获得高产量高质量的甘蔗基因组DNA,能满足后续分子生物学研究的要求.
覃肖良(中国农业大学,北京,100083)
廖青(广西农业科学院农业资源与环境研究所,南宁,530007)
刊 名： 生物技术通报 PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年，卷(期)： 2010 ""(5) 分类号： 关键词： 甘蔗 基因组DNA 提取