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hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ的构建及其在PC-3M细胞中的表达
目的:构建人雌激素受体β(hERβ)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,并转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M.方法:采用RT-PCR法从卵巢囊肿患者切除的部分正常卵巢组织中钓取hERβ全长基因(1 593 bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定.将测序正确的克隆质粒pMD18-T-hERβ和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和BamH Ⅰ进行双酶切,应用基因重组技术构建hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ.质粒经HindⅢ和BamHⅠ双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染PC-3M细胞.结果:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与hERβ全长基因长度一致(1 612 bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的hERβ基因(NM_001437)序列完全一致,表明成功地完成了hERβ的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的PC-3M细胞有绿色荧光蛋白的表达;PCR测定分析,转染细胞hERβ的表达增加.结论:构建完成真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,hERβ基因在PC-3M细胞内成功表达.
作 者： 李峰 邵月婷 何静春 秦宣锋 陈超 王驭良 孙连坤 李扬 赵雪俭 LI Feng SHAO Yue-ting HE Jing-chun QIN Xuan-feng CHEN Chao WANG Yu-liang SUN Lian-kun LI Yang ZHAO Xue-jian 作者单位： 李峰,邵月婷,何静春,孙连坤,李扬,赵雪俭,LI Feng,SHAO Yue-ting,HE Jing-chun,SUN Lian-kun,LI Yang,ZHAO Xue-jian(吉林大学基础医学院病理生理学教研室,吉林大学前列腺疾病防治研究中心,吉林,长春,130021)秦宣锋,陈超,王驭良,QIN Xuan-feng,CHEN Chao,WANG Yu-liang(吉林大学临床医学一系2002级)
刊 名： 吉林大学学报（医学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION) 年，卷(期)： 2006 32(2) 分类号： Q786 Q785 关键词： 受体,雌激素 激素非依赖性前列腺癌细胞 前列腺肿瘤 真核表达 遗传载体 转染【hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ的构建及其在PC-】相关文章：
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