猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

目的:利用巴斯德毕赤酵母表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突糖蛋白S.方法:根据GenBank中猪TGEV纤突耱蛋白S全基因设计一对引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoR Ⅰ、Not Ⅰ酶切位点,2.2 kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体,再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接,Sal Ⅰ线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S,电转化于毕赤酵母GS115感受态细胞,G418筛选鉴定阳性重组子,经甲醇诱导,SDSPAGE检测诱导后上清.结果:对pPIC9k-S重组酵母表达载体的测序证实巳成功克隆了猪TGEV S基因;重组酵母菌诱导表达后,SDS-PAGE检测结果显示表达产物的相对分子质量的为82×103,且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外.结论:利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒(河北分离株)纤突糖蛋白S.

作 者： 康雪燕 张莉 姜世金 张培君 KANG Xue-Yan ZHANG Li JIANG Shi-Jin Zhang Pei-Jun   作者单位： 康雪燕,姜世金,KANG Xue-Yan,JIANG Shi-Jin(山东农业大学,动物医学院,山东,泰安,271018)

张莉,张培君,ZHANG Li,Zhang Pei-Jun(北京市农林科学院,畜牧兽医研究所,北京,100097) 

刊 名： 生物技术通讯  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分类号： Q78  关键词： 猪传染性胃肠炎病毒   纤突糖蛋白   巴斯德毕赤酵母   分泌表达  

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