猪α-1,3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建

猪α-1,3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建

目的:构建猪α-1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)基因的正负筛选打靶载体.方法:以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段;以长约2 kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂,在Xba Ⅰ和Cla Ⅰ位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3'端;以长约5.4 kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂,于Not Ⅰ位点插入该质粒中neo基因的5'端;2.7 kb的负筛选标记tk基因位于载体中同源短臂的3'端外侧.结果与结论:酶切、PCR及测序结果表明,同源臂被正确连接至质粒pLoxP,成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL/GT.

作 者： 常宏宇 宫锋 季守平 鲍国强 李素波 章扬培 李芳 聂亚玲 CHANG Hong-Yu GONG Feng JI Shou-Ping BAO Guo-Qiang LI Su-Bo ZHANG Yang-Pei LI Fang NIE Ya-Ling   作者单位： 常宏宇,CHANG Hong-Yu(第二炮兵总医院,儿科,北京,100088;军事医学科学院,野战输血研究所,北京,100850)

宫锋,季守平,鲍国强,李素波,章扬培,GONG Feng,JI Shou-Ping,BAO Guo-Qiang,LI Su-Bo,ZHANG Yang-Pei(军事医学科学院,野战输血研究所,北京,100850)

李芳,聂亚玲,LI Fang,NIE Ya-Ling(第二炮兵总医院,儿科,北京,100088) 

刊 名： 生物技术通讯  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2010 21(2)  分类号： Q78  关键词： α-Gal表位   猪α-1,3-半乳糖转移酶   基因打靶   异种移植  

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