转座子标签法对阴沟肠杆菌B8拮抗水稻白叶枯病菌相关基因片段的克隆与检测
阴沟肠杆菌B8是从水稻叶面分离获得的具有拮抗水稻白叶枯病菌等多种病原细菌的广谱拮抗菌.为研究其拮抗机理,我们应用转座子标签法对阴沟肠杆菌B8中与抗水稻白叶枯病菌拮抗活性相关的DNA片段进行了克隆.通过自杀性质粒pZJ25介导,将Tn5转座到B8的染色体上,从而筛选到2株拮抗活性丧失的菌株B8B和B8F;用Tn5片段为探针,分别对B8、B8B、B8F进行Southern杂交,结果在B8中无特异条带,而在B8B和B8F中各有一条约20kb和9kb的EcoRⅠ特异条带;分别提取二株突变菌株的基因组DNA,BamHⅠ酶切,克隆于pBS的BamHⅠ位点上,利用Tn5上的Kan抗性,分别筛选到质粒pTLB和pTLF,获得包含Tn5部分序列的B和F二个基因片段,大小约为6kb和7kb;应用pTLB全质粒和pTLF中约0.8kb的BamHⅠ+HpaⅠ外源F片段为探针,对B8、B8B、B8F进行Southern杂交,证实我们克隆到Tn5转座位点周围的二个片段,且他们分别位于B8菌株染色体DNA的二个不同位置.
作 者： 黄海宁 余旭平 陈卫良 龚鸿飞 李德葆 HUANG Hai-ning YU Xu-ping CHEN Wei-liang GONG Hong-fei LI De-bao 作者单位： 黄海宁,陈卫良,龚鸿飞,李德葆,HUANG Hai-ning,CHEN Wei-liang,GONG Hong-fei,LI De-bao(浙江大学,生物技术研究所,浙江,杭州,310029)余旭平,YU Xu-ping(浙江大学,生物技术研究所,浙江,杭州,310029;浙江大学,动物医学系,浙江,杭州,310029)
刊 名： 浙江大学学报（农业与生命科学版） ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES) 年，卷(期)： 2006 32(3) 分类号： Q785 关键词： 阴沟肠杆菌B8 水稻白叶枯病 拮抗相关基因 克隆