金环蛇L-氨基酸氧化酶诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的研究
目的:探讨金环蛇毒中L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株(HUVCE)增殖和凋亡作用的影响.方法:通过阳离子交换层析和肝素亲和层析从金环蛇蛇毒中分离纯化到一个L-氨基酸氧化酶,SDS电泳鉴定其纯度.SDS电泳和HPLC凝胶过滤确定其分子量,并采用MTT法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测L-氨基酸氧化酶对人脐静脉内皮细胞株生长情况、细胞周期以及细胞形态的影响.结果:通过两步层析法从金环蛇毒中分离得到L-氨基酸氧化酶,L-氨基酸氧化酶的表观分子量通过SDS-PAGE测定约为60 kD,通过凝胶过滤测定分子量为70kD.L-氨基酸氧化酶作用于HUVCE细胞12 h后,细胞的生长明显受到抑制,L-氨基酸氧化酶作用的半数抑制量为2.8 mg/L.流式细胞仪直方图上可见明显的亚二倍体峰,随着L-氨基酸氧化酶作用浓度的增加,凋亡率增加(P<0.05),细胞分裂增殖指数降低(P<0.05);激光共聚焦显微镜观察0.03 mg/L的L-氨基酸氧化酶作用12 h细胞出现早期凋亡,3 mg/L的L-氨基酸氧化酶作用12 h细胞核浓缩,部分细胞碎裂.结论:通过两步层析法从金环蛇毒中分离得到L-氨基酸氧化酶,该氨基酸氧化酶是由单亚基组成的.L-氨基酸氧化酶能诱导HUVCE凋亡从而对其生长具有抑制作用.
